人血清白蛋白-C肽融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达

• 作者: 周利苹 张文婷 张莲芬 蔡燕飞 金坚 雷楗勇
• 来源期刊: 生物技术通报
• 学科: 生物学
• 关键词: C肽 人血清白蛋白 融合蛋白 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2008,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 71-75,80
• 页数: 6页
• 分类号: Q94
• 字数: 3577字
• 语种: 中文

摘要

目的构建重组表达人血清白蛋白(HSA)-C肽(CP)融合蛋白的毕赤酵母表达菌株.方法根据表达系统的密码子偏好性优化CP基因,酶切连接pBlue-HSA质粒(HSA1 800bp)和CP(100bp)基因,将HSA-CP融合基因双酶切后插入分泌表达栽体pPIC9K中,重组质粒pPIC9K-HSA-CP经SalⅠ线性化后,电击转化毕赤酵母GS115,表型筛选Mut+转化子.PCR鉴定后,用甲醇诱导摇瓶分泌表达.结果融合基因约为1 900bp,序列测定正确.SDS-PAGE分析表明表达融合蛋白的相对分子量约为70kD,摇瓶培养表达量为140mg/L,Western blot鉴定显示表达的融合蛋白为HSA和CP的杂合分子.结论实现了HSA-CP融合蛋白在毕赤酵母中的分泌表达,细胞活性研究显示HSA-CP融合蛋白对人胚肾293细胞的生长具有一定的促进作用.