肝细胞内与HBeAg结合的新蛋白编码基因E-36的筛选与克隆

• 作者: 张健 张玲霞 成军 李克 梁耀东 王琳 邵清 陆荫英 陈天艳
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 肝炎E抗原,乙型 基因 双杂交系统技术
• 年，卷（期）: 2003,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 1077-1079
• 页数: 3页
• 分类号: R512.63
• 字数: 2690字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2003.12.010

摘要

目的探讨HBeAg在乙型肝炎病毒(HBV)致病过程中所起的作用.方法利用酵母双杂交系统3筛选并克隆人肝细胞cDNA文库中与HBeAg有相互作用的蛋白的基因.将HBeAg编码基因克隆入酵母表达载体pGBKT7中构建诱饵质粒,转化酵母细胞AH109并在其内表达,然后与转化了人肝cDNA文库质粒pACT2的酵母细胞Y187进行配合,双重筛选阳性菌落,提取质粒并测序.结果通过行生物信息学分析,发现其中有1个未知基因,命名为E-36.结论根据GenBank中的序列信息设计引物,从HepG2细胞中扩增出E-36新基因的完整序列并克隆到另一酵母表达载体pGADT7中,并用体外免疫共沉淀方法再次验证了HBeAg与E-36新蛋白之间有结合作用,为HBeAg的功能研究提供了新线索.