戊型肝炎病毒Ⅰ型ORF3蛋白的表达、纯化及抗原性分析

• 作者: 吴星 张华远 李卓 李河民 林京香 王佑春 蓝海云 辜文洁
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 戊型肝炎 IgG IgM 酶联免疫吸附测定
• 年，卷（期）: 2003,（5）
• 所属期刊栏目: 免疫检测
• 页码范围: 401-404
• 页数: 4页
• 分类号: R511
• 字数: 2967字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2003.05.028

摘要

目的表达戊型肝炎病毒(HEV)Ⅰ型ORF3全长基因片段,纯化表达产物并进行抗原性分析. 方法将Ⅰ型HEV ORF3基因连接到融合表达载体pThioHis B, IPTG诱导表达;Western blot分析表达产物的抗原活性;用经高效液相色谱纯化的表达产物作为抗原,制备血清抗-HEV IgG及抗-HEV IgM诊断试剂,用国家参考品进行考核;用所得抗原检测临床血清中抗-HEV抗体,比较其与Genelabs试剂盒检测结果的差异. 结果含有Ⅰ型pThioHis B/ORF3质粒的菌株表达了相对分子质量(Mr)为26×103的融合蛋白,免疫印迹表明其能与戊型肝炎患者恢复期血清发生特异性反应.国家参考品考核结果显示,用表达产物制备的抗HEV IgG诊断试剂阳性符合率为100%(10/10),阴性符合率为96.7%(29/30),总符合率为97.5%(39/40);制备的抗-HEV IgM诊断试剂阳性符合率为83.3%(10/12),阴性符合率为100%(20/20),总符合率为93.8%(30/32).与Genelabs公司试剂盒检测结果比较,抗-HEV IgG和抗-HEV IgM ELISA总符合率分别为94.5%和87.0%. 结论本实验所得全长ORF3基因工程表达产物具有良好的抗原性,可用于制备抗-HEV诊断试剂.