重组人Ⅱ型胶原250-270多肽的表达及活性研究

• 作者: 朱平 李学义 樊春梅 王彦宏 陈庆平 黄向阳
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 类风湿关节炎 Ⅱ型胶原 重组人Ⅱ型胶原250-270多肽 T细胞增殖
• 年，卷（期）: 2003,（2）
• 所属期刊栏目: 临床免疫学
• 页码范围: 152-154
• 页数: 3页
• 分类号: R593
• 字数: 3024字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2003.02.024

摘要

目的表达、分离、纯化重组人Ⅱ型胶原250-270多肽(recombinant human collagen type Ⅱ peptide 250-270,rhCⅡ250-270)并研究其对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis, RA)患者外周血单个核细胞(PBMC)和关节滑液单个核细胞(SFMC)中特异性T细胞的活化作用. 方法利用DNA合成、聚合酶链式反应、重组DNA等基因工程的方法构建含有人Ⅱ型胶原功能性多肽CⅡ250-270多聚基因的表达载体pGEX-4T-1,转化E.coli BL21,融合表达目的蛋白,经Glutathione Sepharose○R 4B亲和层析柱分离纯化,12%聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)和凝胶薄层扫描测量其相对分子质量(Mr)和纯度.以不同浓度(0.1、1.0、10、100、1000μg/ml)的6聚rhCⅡ2 50-270和化学合成的CⅡ250-270刺激体外培养的RA患者PBMC和SFMC,等浓度的GST蛋白和PBS作为阴性对照,流式细胞仪测定刺激前后2组培养细胞中T细胞CD69的表达率,以分析其对特异性T细胞的活化作用. 结果融合表达的目的产物经SDS-PAGE分析,相对分子质量(Mr)大小约为43×103,与预期相符.分离纯化的6聚rhCⅡ250-270经SDS-PAGE凝胶薄层扫描,纯度为89%,浓度为2.1mg/ml.FACS分析:经100μg/ml浓度的6×rhCⅡ250-270刺激3d后,RA(9例)患者PBMC和SFMC T细胞中CD69+细胞率分别为(18.05±4.34)%和(25.17±4.89)%,显著高于同型对照GST组水平[(1.02±0.48)%,(1.25±0.23)%,(P＜0.01)],而与化学合成的CⅡ250-270组无统计学差异.进一步分析表明,同组患者滑液中CD69的表达显著高于外周血(P＜0.01). 结论纯化的6聚rhCⅡ250-270多肽经初步验证具有活化RA患者特异性T细胞的特性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈庆平	西安市第五人民医院风湿科	25	107	6.0	9.0
2	樊春梅	第四军医大学西京医院临床免疫科	35	257	9.0	14.0
3	王彦宏	第四军医大学西京医院临床免疫科	41	299	11.0	15.0
4	朱平	第四军医大学西京医院临床免疫科	74	630	14.0	20.0
5	李学义	第四军医大学西京医院临床免疫科	15	115	7.0	10.0
6	黄向阳	西安市第五人民医院风湿科	1	3	1.0	1.0