细菌16S-23S rRNA 基因特异DNA图谱的分子诊断

• 作者: 付君芬 俞锡林 尚世强 杜立中 洪文谰 董关萍
• 来源期刊: 中华儿科杂志
• 学科: 医学
• 关键词: RNA,核糖体,16S RNA,核糖体,23 S 基因,rRNA 聚合酶链反应 多态性,限制性片段长度 序列分析
• 年，卷（期）: 2003,（9）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 692-696
• 页数: 5页
• 分类号: R37
• 字数: 3680字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:0578-1310.2003.09.014

摘要

目的应用聚合酶链反应(PCR)、限制性内切酶片段长度多态性分析(RFLP)及测序技术,建立检测不同属种细菌的 16S-23SrRNA基因区间的特异图谱.方法对临床上常见的细菌进行PCR扩增、RFLP、分子克隆及序列分析,同时对临床标本进行培养与PCR-RFLP比较.结果 27株不同细菌行PCR扩增后,得到不同DNA 图谱.其中15种细菌经PCR扩增即可区分,另10种经Hinf I或Alu I 酶切后才能区分.肺炎克雷伯菌与坚韧肠球菌的差异只在第779位碱基上不同,Xma III酶能区别.42例临床诊断为新生儿败血症者,15例培养阳性,阳性率35.7%;而PCR阳性者则为27例,阳性率为64.29%,明显高于血培养(P<0.01).6例脑脊液标本中,1例PCR及培养均阳性(表皮葡萄球菌);2例培养阴性标本,其PCR也阳性;经图谱分析为葡萄球菌,1例培养为新型隐球菌的脑脊液标本PCR检测为阴性.另2例PCR及培养均阴性.结论建立了PCR-RFLP技术快速检测细菌16S-23S rRNA基因区间的方法,具有特异、敏感、快速、准确的特点,为临床细菌感染的病原诊断提供新的科学依据.