人DNA 拓扑异构酶Ⅰ在毕赤酵母中的表达及发酵条件优化

• 作者: 何国平 周世宁 戴欣 杨国武 林永成 袁保红
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 人DNA拓扑异构酶I 分泌表达 优化 毕赤酵母
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 基因工程
• 页码范围: 181-186
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 5554字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2004.02.006

摘要

为了在体外以人DNA拓扑异构酶Ⅰ(hTopo Ⅰ)为靶位进行抗肿瘤化合物的快速筛选,用RT-PCR法从Hela细胞中克隆了hTopo Ⅰ基因ORF并在毕赤酵母中首次成功表达,表达产物可分泌到发酵上清,易于制备.蛋白酶A缺陷的重组酵母(SMD-hTopoI)分泌重组酶的能力比具有蛋白酶A活性的重组酵母(X33-hTopoI和KM-hTopoI)更高.通过发酵条件的优化,使用BMMY(pH 7.25),于20℃,每隔24h补加0.5% (V/V)的甲醇和3% (V/V)的营养液,SMD-hTopo Ⅰ诱导72h后可表达最高的酶活力(43000u/mL),发酵上清中hTopo Ⅰ可达11 mg/L,约占总蛋白的10%.SDS-PAGE和Western blot分析显示,表达的hTopo Ⅰ为91kD蛋白,无糖基化修饰.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林永成	中山大学化学与化工学院天然产物研究室	196	2632	27.0	42.0
2	周世宁	中山大学生命科学学院生物化学系	91	1923	23.0	40.0
3	何国平	香港理工大学应用生物与化学技术系	3	49	3.0	3.0
4	杨国武	中山大学生命科学学院生物化学系	79	184	7.0	9.0
6	戴欣	中山大学生命科学学院生物化学系	9	260	5.0	9.0
9	袁保红	中山大学生命科学学院生物化学系	6	91	5.0	6.0