重组人载脂蛋白A-Ⅰ在毕赤酵母(Pichia pastoris)中的高表达

• 作者: 冯美卿 吴满平 周珮 宋大新 蔡钦生 钟江
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 重组人载酯蛋白ApoAⅠ 毕赤酵母 表达优化
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 蛋白质工程
• 页码范围: 906-911
• 页数: 6页
• 分类号: Q554
• 字数: 4965字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2004.06.018

摘要

高密度脂蛋白(High-density Lipoprotein,HDL)是血浆中重要的脂蛋白,其主要成分为载脂蛋白A Ⅰ(Apoliprotein AⅠ,ApoAⅠ为了大量制备该蛋白,首先尝试利用Pichia pastoris表达系统高效表达ApoAⅠ.通过PCR扩增获得天然含人载脂蛋白ApoAⅠ的基因片段,将其插入到P.pastoris分泌型载体pPIC9K上,BglⅡ酶切线性化后电转化P.pastoris GS115,将获得的1000多个转化子依次在含不同G418浓度的YPD平板筛选高抗性转化子,得到的22个高抗性转化子经甲醇诱导,SDS-PAGE检测得到6株高表达菌.然后对其中的高表达菌株AP16的培养及诱导条件进行了优化,结果显示:接种后培养24～28h,转入诱导阶段,培养基pH值在7～7.5,菌体密度OD600=80左右,以1%甲醇诱导96h最有利于ApoAⅠ的表达,表达水平达160mg/L.14L发酵罐结果显示表达水平与摇瓶相当,均高于其它表达系统,为大批量制备奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	钟江	复旦大学生命科学院微生物教研室	67	232	7.0	12.0
2	蔡钦生	复旦大学药学院生物合成教研室	7	53	4.0	7.0
3	冯美卿	复旦大学药学院生物合成教研室	29	117	6.0	9.0
4	周珮	复旦大学药学院生物合成教研室	32	228	9.0	14.0
5	吴满平	复旦大学药学院生物合成教研室	16	147	7.0	12.0
6	宋大新	复旦大学生命科学院微生物教研室	11	43	4.0	6.0