结核杆菌H37Rv异柠檬酸裂解酶基因的克隆及表达

• 作者: 关艳 李大为 肖春玲
• 来源期刊: 中国医学科学院学报
• 关键词: 异柠檬酸裂解酶 结核杆菌H37Rv 克隆 基因表达
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 368-371
• 页数: 4页
• 分类号: Q786
• 语种: 中文

摘要

目的构建在大肠杆菌中高效表达结核杆菌H37Rv异柠檬酸裂解酶(ICL)的重组质粒,实现ICL在原核表达系统的高效稳定表达.方法采用PCR和克隆技术构建含有结核杆菌H37Rv ICL基因的表达质粒pET30(a)-Rv0467,转化至E.coli BL21(DE3)中诱导表达.目的蛋白经金属螯合层析纯化后,对其活性进行初步研究.结果构建了高效表达结核杆菌H37Rv ICL的质粒;在E.coli BL21(DE3)中得到高效表达,目的蛋白占总蛋白含量的30%;表达产物以可溶性形式存在,通过金属螯合层析纯化,所得酶的纯度为90%;目的蛋白具有ICL的活性.结论利用原核表达系统成功克隆表达了结核杆菌H37Rv的ICL,为以ICL为靶点建立新型抗结核药物奠定了基础.