异柠檬酸裂解酶的制备及其抑制剂筛选模型的建立

• 作者: 杨延辉 王晻 肖春玲 郝雪秦 高鹏
• 来源期刊: 中国抗生素杂志
• 关键词: 柠檬酸裂解酶 筛选模型 异柠檬酸裂解酶抑制剂 高通镀筛选
• 年，卷（期）: 2009,（8）
• 所属期刊栏目: 微生物药物筛选
• 页码范围: 467-470,511
• 页数: 5页
• 分类号: R978.3
• 语种: 中文

摘要

目的 制备结核分枝杆菌异柠檬酸裂解酶(isocitrate lyase,ICL)并建立ICL抑制剂筛选模型.方法 通过四步层析法或金属螯合层析法纯化大肠埃希菌BL21(DE3)表达的ICL,并以异柠檬酸为底物,用纯化的ICL裂解舁柠檬酸,生成乙醛酸可与苯肼反应生成苯腙,苯腙在324nm波长下产生光吸收峰,测定酶促反应体系在324nm波长下光吸收检测异柠檬酸裂解酶的活性,根据待测样品对酶活性的抑制程度,筛选异柠檬酸裂解酶抑制剂.结果 用金属螯和层析法得到纯度为90%、比活力为2.8U/mg的ICL,建立并优化ICL抑制剂筛选模型,模型的信噪比(S/N)远大于3,变异系数(CV)远小于10%.结论 通过金属螯合层析法获得了特异性高、稳定性好的ICL抑制剂筛选模型,该模型可有效的应用于异柠檬酸裂解酶抑制剂的高通量筛选.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	肖春玲	中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所重点室	12	95	4.0	9.0
2	高鹏	中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所重点室	31	160	6.0	12.0
3	杨延辉	中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所重点室	3	50	1.0	3.0
4	郝雪秦	中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所重点室	8	11	2.0	2.0
5	王晻	中国医学科学院中国协和医科大学医药生物技术研究所重点室	1	0	0.0	0.0