不同作用机制的5-脂氧化酶抑制剂筛选方法的建立和应用

• 作者: 任晓 朱京童 段宝玲 范玉玲 蒋沁 赵广荣 路新华 郑智慧 马瑛
• 来源期刊: 中国抗生素杂志
• 关键词: 5-脂氧化酶 抑制剂 铁螯合 炎症
• 年，卷（期）: 2012,（6）
• 所属期刊栏目: 微生物与药物筛选
• 页码范围: 443-448
• 分类号: R96
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-8689.2012.06.009

摘要

目的 拟建立体外高通量的用于筛选不同作用机制的5-脂氧化酶(5-1ipoxygenase,5-LOX)抑制剂的方法.方法 以花生四烯酸为底物,2,7-二氯二氢荧光素乙酰乙酸为荧光反应物,建立荧光测活方法,并通过不加Fe3+和外加10mmol/L Fe3+的方法建立两种不同的5-LOX酶反应体系.结果 5-脂氧化酶在不加Fe3+和外加10mmol/L Fe3+的反应体系中的信号/本底(S/B)值分别为5.02和37.81,两种反应的Z’因子值均约为0.7.5-脂氧化酶铁离子螯合抑制剂齐留通在未加Fe3+的反应体系对酶有强的抑制活性,其IC5o值为0.21μM,在外加10mmol/L Fe3+的反应体系对酶无抑制作用.非铁离子螯合抑制剂去甲二氢愈创木酸在两种反应体系对酶均有抑制作用,其IC5o值分别为0.52和0.93μM.利用该方法从微生物代谢产物中筛选到两个活性化合物WF-5239和Trivaric acid,其中化合物WF-5239在未加Fe3+的反应体系对酶有强的抑制活性,其IC50值为2μmol/L,在外加10mmol/L Fe3+的反应体系对酶无抑制作用,推测可能为铁离子螯合型抑制剂.化合物Trivaric acid在两个筛选体系对酶的抑制作用基本一致,其IC50值均约为5.36μmol/L,推测可能为非铁离子螯合型抑制剂.结论 本研究建立了灵敏、稳定的可用于筛选不同作用机制5-LOX抑制剂的方法.