结核分枝杆菌1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶抑制剂高通量筛选模型的建立与应用

• 作者: 关艳 杨延辉 步洪强 肖春玲 胡辛欣 蒙建州
• 来源期刊: 中国抗生素杂志
• 关键词: 结核分枝杆菌 1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶 筛选模型 抑制剂
• 年，卷（期）: 2014,（6）
• 所属期刊栏目: 微生物药物筛选
• 页码范围: 401-407
• 页数: 7页
• 分类号: R378
• 语种: 中文

摘要

目的 建立1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶抑制剂的高通量筛选模型,从不同来源的样品中筛选该酶抑制剂,以期获得作用于该靶点的全新作用机制的抗结核药物先导物.方法 以结核分枝杆菌H37Rv基因组为模板,克隆基因dxr构建重组表达质粒pET28a(+)::dxr; IPTG诱导表达并经Ni2+亲和层析柱纯化得到具有天然酶活性的1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶;基于该酶促反应底物NADPH在340nm波长下具有光吸收的原理,建立和优化酶活测定体系,构建并评价酶抑制剂的高通量筛选模型;应用此模型进行酶抑制剂筛选并进行抑酶活性及抗菌活性评价.结果 成功得到具有天然酶活性的1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶,构建了1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶抑制剂的高通量筛选模型并得到3个抑酶活性较高的阳性化合物,其中化合物IMB-DXR-B1为该酶的反竞争性抑制剂,其K值为6.2μmol/L,IC50为29.5μmol/L,该化合物对于结核分枝杆菌H37Rv的MIC为32μg/mL.结论 成功构建了稳定性好、灵敏度高的结核分枝杆菌1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶抑制剂的高通量筛选模型,筛选得到具有抗结核活性的1-脱氧-D-木酮糖-5-磷酸还原异构酶抑制剂,为获得全新作用靶点的新型抗结核药物奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	杨延辉	宁夏医科大学基础医学院	13	1	1.0	1.0
2	肖春玲	北京协和医学院中国医学科学院医药生物技术研究所	7	13	2.0	3.0
3	蒙建州	北京协和医学院中国医学科学院医药生物技术研究所	2	3	1.0	1.0
4	步洪强	北京协和医学院中国医学科学院医药生物技术研究所	1	1	1.0	1.0
5	关艳	北京协和医学院中国医学科学院医药生物技术研究所	2	1	1.0	1.0
6	胡辛欣	北京协和医学院中国医学科学院医药生物技术研究所	1	1	1.0	1.0