苏云金芽孢杆菌cry1Aa14基因的分离、克隆及其表达

• 作者: 任莹博 宋福平 张杰 李国勋 王勤英 陈中义 黄大昉
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 苏云金芽孢杆菌 crylAa14基因 克隆 表达 杀虫活性
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 188-191
• 页数: 4页
• 分类号: S3
• 字数: 3169字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2004.02.015

摘要

Bt25是中国自行分离的对小菜蛾(Plutella xylotella)具有高毒力的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis),经PCR-RFLP鉴定含有crylAa基因.以全长基因PCR产物的粘端定向克隆的方法,设计1对特异引物,以Bt25质粒DNA为模板扩增crylAa全长基因.序列测定结果表明,该基因编码区为3 552bp,编码1 183个氨基酸,分子量为133.7 kD,pI 4.755.该基因序列已在GenBank注册,登记号为AY197341,并获得正式命名crylAa14.在氨基酸序列918～1180间,和已知的11种CrylAa存在22～23个氨基酸的差异(其中1094～1097的4个氨基酸无对应序列),而这段区域和CrylAb氨基酸序列的对应区域无差异.crylAa14全长基因插入Bt表达载体,获得了重组表达质粒pBYBl,转化Bt无晶体突变株HD73cry-,经过抗性筛选、DNA酶切分析和PCR检测,证实转化成功.SDS-PAGE分析表明,该基因在上述受体中能正常表达133kD蛋白.杀虫生物测定结果表明,crylAa14表达产物对小菜蛾幼虫具有显著的毒杀作用,与crylAa12进行比较,毒力无明显差异.这种单基因菌株的发现及其基因的获得,为害虫抗性研究和高效工程菌的构建提供了重要实验材料.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈中义	中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室	13	527	8.0	13.0
2	黄大昉	中国农业科学院生物技术研究所	96	1673	22.0	38.0
3	王勤英		70	410	12.0	16.0
4	李国勋		25	333	11.0	17.0
5	宋福平	中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室	51	535	14.0	20.0
6	任莹博	中国农业科学院植物保护研究所植物病虫害生物学国家重点实验室	1	12	1.0	1.0