苏云金芽孢杆菌cry2Aa基因的克隆、表达与活性

• 作者: 姚江 宋福平 张杰 李海涛 郭巍 高继国 黄大昉
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 苏云金芽孢杆菌 cry2Aa基因 克隆 表达 杀虫活性
• 年，卷（期）: 2005,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 787-791
• 页数: 5页
• 分类号: Q94
• 字数: 3360字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2005.06.020

摘要

B-8-G和Ly30是我国自行分离的对多种重要农业害虫具有高毒力的苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)菌株,经PCR-RFLP鉴定均含有cry2Aa基因.根据cry2Aa全长基因序列设计特异引物,以B-8-G总DNA为模板扩增其中的cry2Aa全长基因,与大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pET-21b相连接,获得含有cry2Aa全长基因的重组质粒pET2Aa,该基因在大肠杆菌BL21菌株能够正常表达65 kD蛋白.通过构建Ly30总DNA文库方法从中筛选获得cry2Aa基因,将其连接至Bt-E.coli穿梭表达载体pHT315上,转化Bt无晶体突变株HD-73中,该基因能正常表达65 kD蛋白,并形成立方体状晶体.这两种基因序列已被国际Bt基因命名委员会分别正式命名为cry2Aa9和cry2Aa10.杀虫生物活性测定结果表明cry2Aa基因表达产物对黄胫小车蝗(Oedaleusinfernlis)、尖音库蚊(Culex pipiens)、黑翅伊蚊(Aedes melanopterus)、水稻二化螟(Chilo suppressalis)和小菜蛾(Plutellaxylostella)幼虫均具有显著的毒杀作用.首次报道cry2Aa10基因表达蛋白对蝗虫、库蚊具有杀虫活性.这些基因的获得,将为高效工程菌和抗虫转基因植物的研制提供了新的基因资源.