双价苏云金芽孢杆菌cry基因载体构建及其在大肠杆菌中表达杀虫活性

• 作者: 吴限 张杰 李丽华 管宇 陈中义 韩岚岚 黄大昉
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 苏云金芽孢杆菌 杀虫晶体蛋白基因 基因组合 大肠杆菌 杀虫活性
• 年，卷（期）: 2002,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 272-277
• 页数: 6页
• 分类号: S43
• 字数: 2876字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2002.03.015

摘要

研究和利用不同苏云金芽孢杆菌(Bacillusthuringiensis,Bt)杀虫蛋白之间的增效作用是构建高效遗传工程杀虫剂、预防和延缓害虫抗性的重要途径.Bt Cry1Ab,Cry1Ac和Cry2Aa蛋白对重要的鳞翅目农业害虫具有高毒力,质粒pHT-BSK含有能在大肠杆菌(Escherichia coli)-枯草芽孢杆菌(B.subtilis)有效表达的生物安全性标记基因卡那霉素抗性基因.将含研cry1Ab,cry1Ac和cry2Aa全长基因的BamH I/PstI、BamH I/XhoI和SmaI(BamH I)/HindⅢDNA片段与pHT-BSK相应酶切产物连接,获得了单价cry/km1组合的重组质粒pBlue-1Ab-km1、pBlue-1Ab和pHT-2Aa;cry1Ab,cry1Ac DNA片段与pHT-2Aa相应酶切产物相连接获得了Bt双价基因/km1组合重组质粒pBlue-cry1Ab-km1-2Aa和pBlue-cry1Ac-km1-2Aa,重组质粒中所有cry基因与km1均形成特异的BamH I片段.限制酶切电泳分析和特异PCR扩增证实了重组质粒的准确连接.含有重组质粒的大肠杆菌显示了对小菜蛾(Plutellaxylostella)和玉米螟(Ostrinia furnacalis)的杀虫活性,对小菜蛾双价基因毒力高于单价基因,但对玉米螟它们之间没有明显差异.研究为进一步阐明Btcry2Aa与cry1Ab和cry1Ac之间在不同微生物细胞中的共表达及其表达产物之间的相互作用和构建双价基因杀虫工程菌株创造了条件.