苏云金杆菌cry1Ib基因的克隆、表达与活性研究

• 作者: 刘廷辉 李瑞军 王睿文 董建臻
• 来源期刊: 河北农业大学学报
• 关键词: 苏云金芽胞杆菌 cry1Ib基因 克隆 表达 杀虫活性测定
• 年，卷（期）: 2014,（1）
• 页码范围: 64-68
• 页数: 5页
• 分类号: S435.621.2+9
• 语种: 中文
• DOI: 10.13320/j.cnki.jauh.2014.0013

摘要

根据cry1Ib类基因的全长序列设计引物,以苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)GS8菌株的质粒DNA为模板扩增出片段长为2.16 kb的cry1Ib全长基因,插入大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pET-21b,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,诱导表达出81.20 kD的蛋白.推导的分子量为81.20 kD,生物信息学分析表明其由719个氨基酸组成,氨基酸序列与Cry1Ib1蛋白的相似性为99.58％,不同于已知的10种Cry1Ib蛋白,是一种新的Cry1Ib蛋白,其基因已被国际基因命名委员会正式命名为cry1Ib3.杀虫活性测定结果表明:Cry1Ib3对小菜蛾(Plutella xylostella)有很强的杀虫活性,LC50为0.076 3μg/mL,而对甜菜夜蛾(Spodo ptera exigua)、粉纹夜蛾(Trichoplusia ni)、家蚕(Bombyx mori)、棉铃虫(Helicoverpa armigera)和榆兰叶甲(Pyrrhalta aenescens)基本上没有活性.该基因的获得为我国抗虫转基因作物和工程菌的研制提供新的基因来源,亦为筛选延缓昆虫抗性产生的基因组合提供了重要依据.