Cry1Ia和Cry2Ab融合蛋白的表达

• 作者: 史宗勇 王兴春 郭俊佩 郭小琴 钱红梅 高建华
• 来源期刊: 山西农业大学学报(自然科学版)
• 关键词: 苏云金芽孢杆菌 cry 1Ia cry2Ab 融合蛋白 蛋白表达
• 年，卷（期）: 2019,（3）
• 所属期刊栏目: 动物科学
• 页码范围: 101-105
• 页数: 5页
• 分类号: Q78
• 语种: 中文
• DOI: 10.13842/j.cnki.issn1671-8151.201811060

摘要

[目的]苏云金芽孢杆菌表达的杀虫蛋白Cry1 Ia和Cry2Ab对鳞翅目和鞘翅目昆虫具有较好的杀虫活性.为充分利用已有Cry蛋白,本文构建了两者的融合蛋白,并对融合蛋白的原核表达进行检测.[方法]本文将两个基因的编码基因,按照两种先后顺序拼接起来,获得cry 1 Ia-cry 2Ab 融合基因和cry 2Ab-cry 1 Ia 融合基因.另外,将 Cry1 Ia蛋白 N端第一个α-螺旋(7 3 个氨基酸)的编码序列删除后,接入cry 2 Ab 基因 5'端,获得第三个融合基因cry 1 IaD 7 3-cry 2Ab .将 3 个基因分别插入 pHT304 载体,并由cry 1 Ac 基因的启动子和终止子调控其在 Bt细胞中表达.[结果] SDS-PAGE结果显示,Cry1 Ia-Cry2Ab、Cry2Ab-Cry1 Ia和Cry1IaD73-Cry2Ab三个融合蛋白均能够在 Bt 细胞中表达,其测定分子量与预期大小一致,分别约152 kDa、1 52 kDa和144 kDa.蛋白印迹法分析发现,在表达过程中,三种融合蛋白均有一定比例的降解.另外,不同温度对融合蛋白的表达也有不同程度的影响.[结论]本研究构建了 3 种融合杀虫基因并在Bt细胞中成功表达,为进一步解析这类融合蛋白的杀虫活性和机理奠定了基础.