苏云金芽胞杆菌cry1Ia基因的克隆、表达与活性研究

• 作者: 何康来 宋福平 张杰 窦黎明 赵奎军 韩岚岚 黄大昉
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: 苏云金芽胞杆菌 cry1Ia基因 克隆 表达 杀虫活性测定
• 年，卷（期）: 2007,（6）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 1053-1057
• 页数: 5页
• 分类号: S188
• 字数: 2536字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2007.06.025

摘要

根据cry1Ia类基因的全长序列设计引物,以苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis)菌株Btc008的总DNA为模板扩增出片段长为2.1 kb的cry1Ia的全长基因,插入大肠杆菌(Escherichia coli)表达载体pET-21b,转化大肠杆菌BL21(DE3)菌株,诱导表达出 81 kD的蛋白.该蛋白由719个氨基酸组成,推导的分子量为81.2 kD.该蛋白的氨基酸序列不同于已知的12种Cry1Ia蛋白,是一种新的Cry1Ia蛋白,该基因已被国际基因命名委员会正式命名为cry1Ia8.杀虫活性测定结果表明:Cry1Ia8对亚洲玉米螟(Ostrinia furnacalis)和小菜蛾(Plutella xylostella)有很强的杀虫活性,LC50分别为0.268μg/g和2.227μg/mL,其杀虫效果与Cry1Ab和Cry1Ac相当.对大豆食心虫(Leguminivora glycinivorella)也有较好的活性,但对鞘翅目叶甲科害虫榆兰叶甲(Pyrrhalta aenescens)没有活性.该基因的获得将为我国抗虫转基因作物和工程菌的研制提供新的基因来源,为筛选延缓昆虫抗性产生的基因组合提供了重要依据.