基孔肯亚病毒人鼠嵌合抗体在CHO细胞中的表达和活性研究

• 作者: 安小平 左少军 李冰 李建民 樊英茹 童贻刚 郝晓萌 陈薇
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 基孔肯亚病毒 双启动子表达载体 人-鼠嵌合抗体 CHO细胞
• 年，卷（期）: 2004,（10）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 785-789
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 4929字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2004.10.008

摘要

目的在CHO细胞中表达基孔肯亚病毒人-鼠嵌合抗体,并对其活性进行分析. 方法以质粒pcDNA5/FRT为骨架,应用pCI-dhfr1(本室构建并保存)的dhfr基因和hCMV启动子及SV40 polyA,构建了含有共扩增基因的哺乳动物双启动子表达载体,RT-PCR克隆具有中和活性鼠源单克隆抗体的轻重链可变区基因,与人IgG1轻重链恒定区基因融合后亚克隆到表达载体pA的多克隆位点,构建了表达质粒pA-HL, 脂质体转染CHO(dhfr-)细胞,撤掉胸腺嘧啶和次黄嘌呤并不断提高MTX的浓度,筛选表达量高的克隆,扩大培养、收集上清,并纯化,纯化的嵌合抗体进行SDS-PAGE、Western 印迹、抗原结合活性和微量细胞中和实验. 结果在MTX的浓度为2×10-7mol/L时,获得稳定表达细胞株,表达量为5mg/L. 结论成功地在CHO(dhfr-)细胞表达了具有中和活性的基孔肯亚病毒人-鼠嵌合抗体,为制备抗基孔肯亚病的被动免疫制剂奠定了良好的基础.