Nocardia sp.腈水合酶的纯化过程研究

• 作者: 刘铭 曹竹安 李春 王娅娜 黄星
• 来源期刊: 高校化学工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 腈水合酶 离子交换层析 疏水层析 蛋白质纯化 丙烯酰胺
• 年，卷（期）: 2004,（3）
• 所属期刊栏目: 生物化工
• 页码范围: 324-328
• 页数: 5页
• 分类号: Q814.1
• 字数: 4055字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1003-9015.2004.03.011

摘要

对Nocardia sp.高活力腈水合酶进行了纯化研究.在细胞破碎中,超声时间对腈水合酶比酶活存在一个最优值,超声时间为20.00min时得到的比酶活最高.在离子交换层析过程中,采用DEAE-Sepharose作为层析介质,分别对平衡缓冲液pH、离子强度和线性梯度洗脱体积进行了优化.结果表明,采用pH7.20、50mmo1·L-1的Na2HPO4-NaH2PO4溶液作为平衡缓冲液,0.00～1.00mo1·L-1的NaCI线性梯度洗脱,洗脱体积为20～25倍柱体积,此条件下腈水合酶的纯化倍数和酶活收率较佳.以Phenyl-Sepharose FF为层析介质研究了疏水层析精制腈水合酶的工艺过程,采用两步层析优化方法纯化出的Nocardia sp.腈水合酶比酶活达到2648.0 U·mg-1,酶活收率为40.84%,用SDS-PAGE检测其纯度为99 00%以上.Nocardia sp.腈水合酶的两个亚基分子量分别为22.90 kDa和27 38 kDa.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	曹竹安	清华大学化工系生物化工研究所	83	1232	20.0	30.0
2	李春	清华大学化工系生物化工研究所	32	687	13.0	26.0
3	刘铭	清华大学化工系生物化工研究所	45	433	13.0	20.0
4	黄星	清华大学化工系生物化工研究所	9	71	5.0	8.0
5	王娅娜	清华大学化工系生物化工研究所	2	31	2.0	2.0