降低mRNA翻译起始区的稳定性原核非融合表达HAb18GEF

• 作者: 姚西英 张思河 邢金良 陈志南
• 来源期刊: 生物工程学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 翻译起始区 mRNA二级结构 密码子偏性 非融合表达 HAb18G胞外区
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 基因工程
• 页码范围: 175-180
• 页数: 6页
• 分类号: Q786
• 字数: 4547字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-3061.2004.02.005

摘要

为在大肠杆菌中非融合表达肝癌相关抗原HAb18G胞外区片段(HAb18GEF),将HAb18GEF基因的cDNA插入原核表达载体pET21a+.通过计算机辅助设计,对重组的HAb18GEF/pET21a+的mRNA翻译起始区(TIR)的二级结构和密码子偏性同时进行预测.结果发现其存在稳定的茎环结构和许多稀有密码子.通过优化二级结构和优化密码子偏性二种策略分别来降低HAb18GEF/pET21a+的mRNA翻译起始区(TIR)的稳定性.在不改变氨基酸序列的前提下,利用密码子的简并性,通过非连续定点突变实现这两种优化.将突变前后的重组子经酶切鉴定和测序验证后,转化感受态JM109-DE3宿主菌后,随机挑菌37℃下用IPTG诱导表达.SDS-PAGE、间接ELISA、Western blot 和细胞分级分离法分析这些重组子的诱导表达情况.RNA dot blot对比分析优化前后目的基因mRNA的量.结果证明,成功地构建了HAb18GEF/pET21a+及其二种优化突变体.仅优化TIR区二级结构或仅优化TIR区密码子偏性均能实现HAb18GEF蛋白的非融合表达,而未优化的重组子不表达任何HAb18GEF.非融合表达产物在大肠杆菌中主要以包涵体形式存在,高达29.3%.由于过表达和细胞渗漏,培养基和周质腔中也可检测到少许的HAb18GEF.优化二级结构和优化密码子偏性二种策略的HAb18GEF的非融合表达量基本相同.优化前后HAb18GEF转录的mRNA量没有差别.这些结果表明,降低mRNA翻译起始区的稳定性可实现肝癌相关抗原HAb18G胞外区片段在大肠杆菌中的非融合表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	陈志南	第四军医大学基础部细胞工程研究中心	114	603	12.0	18.0
2	邢金良	第四军医大学基础部细胞工程研究中心	35	135	8.0	9.0
3	张思河	第四军医大学基础部细胞工程研究中心	23	106	6.0	9.0
4	姚西英	第四军医大学基础部细胞工程研究中心	13	82	5.0	9.0