湖流域土壤微生物基因组总DNA分离纯化及其质粒文库的初步构建

• 作者: 方惠英 李辉 沈微 王正祥 诸葛健 赵有玺 饶志明
• 来源期刊: 应用与环境生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 太湖流域 土壤微生物 DNA分离纯化 质粒文库
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 页码范围: 774-777
• 页数: 4页
• 分类号: Q78:S154.3
• 字数: 5099字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1006-687X.2004.06.021

摘要

采用研磨/冻融和SDS/蛋白酶K热处理以及CTAB处理等理化方法,直接从太湖流域土壤样品中抽提得到微生物总基因组DNA.所得粗DNA用透析袋法以及Nucleaotrap suspension DNA纯化试剂盒进行了纯化.纯化过的DNA能够满足常用限制性内切酶酶切、细菌16S rDNA通用引物和随机引物进行PCR扩增的要求.将所得纯品DNA经过EcoR I部分酶切之后与酶切并脱磷酸的pSK-空载体连接,再以大肠杆菌JM109为宿主细胞初步构建了土壤微生物基因组文库. 图6 参7