盐生杜氏藻(Dunaliella salina)cDNA文库构建及功能基因筛选

• 作者: 乔代蓉 刘敏 曹毅 李钢 蒋彦
• 来源期刊: 热带亚热带植物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 盐生杜氏藻 cDNA文库 功能基因组学
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 74-78
• 页数: 5页
• 分类号: Q785
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-3395.2004.01.013

摘要

采用Qiagen公司的植物总RNA提取技术、Clontech公司的CreatorTM技术平台以及SMARTTM技术进行cDNA文库构建.从杜氏藻中提取出了高质量的总RNA,通过PowerScript反转录酶反转录杜氏藻的总RNA,采用LD-PCR、酶处理等方法对cDNA进行等比例扩增、纯化,同时使用CHROMA SPIN-400柱子将cDNA分段化,最后将长片段连入pDNR-LIB质粒,1.5 kV,25 μ F电转化大肠杆菌JM109,得到含1.5×106个克隆子的原始文库,滴度为1.5×106cfu ml-1.结合酶切和PCR,对该文库的质量进行了鉴定和统计,文库的平均片段插入长度为1.5kb.采用烯醇酶和UDP葡萄糖脱氢酶的EST作为同源探针,对文库中的功能基因进行筛选,并采用放射性原位杂交法,对扩增文库进行了初筛和复筛,得到了含这两条基因全编码序列的cDNA,烯醇酶为1.8kb,UDP葡萄糖脱氢酶为1.9kb,为今后对该种进行大规模功能基因组学研究奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	乔代蓉	四川大学生命科学学院	72	604	13.0	24.0
2	刘敏	四川大学生命科学学院	312	1381	18.0	24.0
3	曹毅	四川大学生命科学学院	93	714	14.0	25.0
4	蒋彦	四川大学生命科学学院	21	262	9.0	16.0
5	李钢	四川大学生命科学学院	8	57	5.0	7.0