重组人肽抗生素hPAB-β的初步纯化

• 作者: 朱军民 汪正清 胡晓梅 胡福泉 胡金川 金晓琳 陈志瑾 饶贤才 黄建军 黎庶
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 抗生素 重组蛋白
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 42-44
• 页数: 3页
• 分类号: Q7
• 字数: 2979字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-5503.2004.01.014

摘要

目的探索重组人肽抗生素hPAB-β的纯化工艺,为制备高纯度、高活性的重组hPAB-β奠定基础.方法将构建的含pQE32-CP-hPAB-β重组质粒的基因工程菌扩大培养,诱导表达后所得菌体经溶菌酶法裂解,鉴定融合蛋白表达形式;以含融合蛋白的溶液作为纯化的初始样品,采用Ni-NTA resin亲和层析柱对融合蛋白进行纯化,用CNBr裂解,利用Sephadex G-50、Bio-gel P6 DG凝胶进行分子筛层析,利用Macro-Prep High S进行阳离子交换层析,对层析峰行Tris-Tricine电泳分析.结果融合蛋白以包涵体形式存在;亲和层析获得了纯度为82.6%的融合蛋白,CNBr作用20h可完成融合蛋白的裂解;目的肽经纯化后,纯度达95%以上.结论已初步建立了重组人肽抗生素hPAB-β的纯化工艺,并获得了高纯度的肽抗生素hPAB-β.