人肽抗生素hPAB-β重组质粒的构建及其在大肠杆菌中的表达

• 作者: 汪正清 胡福泉 胡金川 金晓琳 饶贤才 黎庶
• 来源期刊: 解放军医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 抗生素类,肽 hPAB-β 融合表达 大肠杆菌 质粒 裂解位点
• 年，卷（期）: 2004,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 113-115
• 页数: 3页
• 分类号: R978.16|Q784|Q786
• 字数: 3014字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0577-7402.2004.02.008

摘要

目的构建人肽抗生素hPAB-β重组质粒,并在大肠杆菌中进行表达,为大量制备hPAB-β奠定基础.方法通过PCR将hPAB-β融合蛋白的CNBr裂解位点改为羟胺裂解,将修改的目标片段克隆到pFAST-HTa质粒中,挑取阳性重组子,酶切出目标片段再亚克隆到pQE32-CP中,含阳性重组子的工程菌用IPTG诱导表达,SDS-PAGE电泳分析,进一步以亲和层析纯化融合蛋白,用羟胺裂解分析.结果构建的pFAST-hPAB-β重组质粒经酶切可得到约230bp的片段,与预期大小相符,测序结果表明其序列正确;构建的pQE32-CP-hPAB-β重组表达质粒酶切亦可切出230bp的片段,测序结果表明序列和阅读框均正确;重组表达质粒在大肠杆菌中能表达出Mr约27×103大小的蛋白,表达量约占细菌总蛋白的43%,该融合蛋白以包涵体形式存在,通过亲和层析可获得该蛋白,纯度为80.4%,该融合蛋白经羟胺裂解1h即可得到与合成肽大小相符的小肽.结论本研究成功构建了含hPAB-β重组质粒的工程菌,为进一步研究和大量制备hPAB-β创造了前提.