基因重组钙调蛋白提取纯化的新方法

• 作者: 封晓华 张颖 杨静娴 林原 鲁凌云
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 基因重组钙调蛋白 肌球蛋白轻链 磷酸化
• 年，卷（期）: 2004,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 142-144
• 页数: 3页
• 分类号: Q78
• 字数: 1804字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-5503.2004.03.005

摘要

目的建立一个简捷高效的纯化基因重组钙调蛋白(Recombinant-calmodulin,CaM)的新方法.方法培养CaM基因重组大肠杆菌,并用IPFG诱导CaM表达,将菌体冻融、超声破碎,再经三氯醋酸、硫酸铵沉淀及超速离心,获得CaM;经SDS-PAGE检测CaM的纯度与相对分子质量,用甘油电泳和Scoin Image密度扫描软件检测CaM激活肌球蛋白轻链激酶(MLCK),从而引起肌球蛋白轻链(MLC20)磷酸化的活性.结果SDS-PAGE显示,重组大肠杆菌表达了大量CaM,且所提取CaM的相对分子质量及纯度均与CaM标准品一致;甘油电泳结果显示,CaM0.1 μg/ml即可激活MLCK,使MLC20部分磷酸化,至3μg/ml时使MLC20双重磷酸化,其所致磷酸化的程度与等剂量的CaM标准品基本相同.ScoinImage密度扫描结果显示,CaM激活MLCK引起MLC20磷酸化的百分率与等剂量CaM标准品差异无显著意义(P＞0.01).结论已建立了简捷高效纯化CaM的新方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	林原	大连医科大学药理教研室	60	445	11.0	18.0
2	杨静娴	大连医科大学药理教研室	18	244	9.0	15.0
3	封晓华	大连医科大学药理教研室	1	0	0.0	0.0
4	鲁凌云	大连医科大学药理教研室	1	0	0.0	0.0
5	张颖	大连医科大学药理教研室	6	26	3.0	5.0