含GFP基因的逆转录病毒与VSV-G蛋白重组形成高滴度假病毒

• 作者: 刘伟 刘德莉 崔磊 曹谊林 李卿 陆峻泓 陈瑾君
• 来源期刊: 上海第二医科大学学报
• 学科: 生物学
• 关键词: 疱疹性口腔炎病毒糖蛋白 绿色荧光蛋白 转染 假病毒
• 年，卷（期）: 2004,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 315-318
• 页数: 4页
• 分类号: Q784|Q789
• 字数: 2669字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-8115.2004.04.023

摘要

目的通过与疱疹性口腔炎病毒糖蛋白G基因(VSV-G)蛋白重组,提高含绿色荧光蛋白(GFP)基因逆转录病毒的感染效率,并使其经受超速离心以达到进一步浓缩.方法应用GFP-RV质粒转染PT67细胞并用G418筛选出GFP阳性克隆,利用其产生的病毒上清液再转染GP2-293细胞,在G418筛选的同时,瞬时转染VSV-G基因.收集该GP2-293细胞产生的重组病毒作滴度测定,并通过低温超速离心制成含GFP病毒的浓缩液,再感染NIH3T3细胞,观察GFP在NIH3T3细胞内的表达情况.结果 GFP-RV质粒转染PT67细胞产生的GFP阳性克隆,随着细胞传代过程,GFP的表达逐渐减弱.GP2-293细胞转染VSV-G 基因后可产生(7.5±1.4)×l05cfu/mL的GFP重组假病毒,将其浓缩液转染NIH3T3细胞,可见GFP在细胞内有较强的表达.结论逆转录病毒与VSV-G共转染GP2-293包装细胞可以形成高滴度的假病毒,由此得到含GFP基因的病毒上清液,其在组织工程中应用范围更广泛.