人突触相关蛋白抗原表位分析及多克隆抗体的制备

• 作者: 刘俊文 唐蔚青 屈顺林 杨向东 王仁 王抒
• 来源期刊: 中国动脉硬化杂志
• 关键词: 病理学与病理生理学 人突触相关蛋白抗原 抗原表位分析 泡沫化相关基因FRG4
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 研究论文摘要
• 页码范围: 99
• 页数: 1页
• 字数: 891字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1007-3949.2004.01.039

摘要

目的泡沫化细胞差异表达基因FRG4经生物信息学分析,与人突触相关蛋白基因有很高同源性,经联机检索,有关突触相关蛋白的研究很少,与脂蛋白代谢、泡沫细胞形成和凋亡的关系没有报道.本文在对泡沫化相关基因FRG4分析的基础上,利用计算机软件进行抗原表位分析,制备特异的抗人突触相关蛋白的多克隆抗体,为进一步深入研究其表达和功能提供条件.方法与结果①选取抗原多肽:利用ExPASy软件和BioEdit软件对FRG4 cDNA序列进行亲水性分析,预测其二级结构;使用Lasergene99软件预测其抗原决定族;根据亲水性、二级结构、偶联难易及实验难度选取抗原13肽PKLVKEEVFWRNY.②多肽合成及交联:采用美国ABI公司的多肽自动合成仪,以固相合成法合成,合成产物经高效液相色谱纯化检测,纯度达到90%以上;抗原多肽与血兰蛋白用BDB法交联,与不完全弗氏佐剂等体积混合包被.③动物免疫:多点皮下注射抗原免疫新西兰兔,每两周强化免疫一次,第三次免疫后10天取耳血测抗体效价(ELISA法).④抗血清收获及检测:第四次免疫后第十至十四天经颈动脉放血,分离抗血清,冷冻抽干,-20℃保存.高效液相色谱检测显示抗体纯度达82.79%,抗体滴度为1∶16 000,免疫印迹方法检测在40 kDa处有一条带,与软件分析结果相符合.结论制备了高效的免抗人突触相关蛋白多克隆抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王抒	卫生部北京医院老年医学研究所生物化学室	58	836	15.0	27.0
2	杨向东	南华大学心血管病研究所	44	222	8.0	12.0
3	王仁	南华大学心血管病研究所	19	59	4.0	6.0
4	唐蔚青	卫生部北京医院老年医学研究所生物化学室	12	62	3.0	7.0
5	刘俊文	南华大学心血管病研究所	13	51	4.0	6.0
6	屈顺林	南华大学心血管病研究所	36	161	7.0	10.0