Pen a 1表位抗原多克隆抗体的制备及鉴定

• 作者: 兰丽平 刘超超 潘家荣 牟慧 王志东 睢珂 许舒婷 赵杰 高美须
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: Pen a 1 表位多肽抗原 多克隆抗体 间接竞争ELISA 免疫印迹
• 年，卷（期）: 2013,（15）
• 所属期刊栏目: 贮藏·保鲜·加工
• 页码范围: 3191-3198
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2013.15.013

摘要

[目的]建立一种识别、检测致敏蛋白的新方法.[方法]Pen a 1为虾中主要的致敏蛋白,从其5 个主要IgE结合区中选择一段具有代表性的(85-105位)含21个氨基酸的多肽序列,进行化学合成,将多肽分别与匙孔血蓝蛋白(KLH)和牛血清白蛋白(BSA)偶联,制得免疫原和包被原,免疫原免疫新西兰纯种白兔得到多克隆抗体.以刀额新对虾蛋白、卵清蛋白、花生蛋白和牛奶蛋白为样品,免疫印迹鉴定多克隆抗体对刀额新对虾中Pen a 1蛋白的特异性.[结果]经 Ellman试剂测定多肽与 KLH、BSA的偶联比分别为12:1和8:1.间接非竞争 ELISA 测定多克隆抗体的效价达1.024×106,间接竞争ELISA (icELISA)测定该多克隆抗体对多肽的IC50和IC10分别为0.4324 μg.mL-1和0.0004 μg.mL-1,表明多克隆抗体对多肽具有较强的灵敏性.免疫印迹试验结果表明,此多克隆抗体仅可识别刀额新对虾蛋白中的Pen a 1蛋白,对所选其它物种蛋白无响应.[结论]通过人工合成多肽制备的抗体可用于目标致敏蛋白质的检测分析,该方法快捷灵敏,且具有较高的特异性.