大鼠抗人β-catenin多克隆抗体的制备与鉴定

• 作者: 刘晓平 张倩 李淼 牛夏忆 陈云雨
• 来源期刊: 中国免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: β-catenin 原核表达 亲和层析 荧光偏振 大鼠多克隆抗体
• 年，卷（期）: 2019,（16）
• 所属期刊栏目: 免疫学技术与方法
• 页码范围: 1992-1998
• 页数: 7页
• 分类号: R392.11
• 字数: 5611字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1000-484X.2019.16.013

摘要

目的:原核表达和分离纯化人β-catenin(138-781 aa)蛋白并制备特异性大鼠抗人β-catenin多克隆抗体.方法:利用PCR扩增β-catenin基因片段并克隆至pET-30a(+)表达载体构建重组质粒.将重组质粒转化到大肠杆菌Escherichia coli Rosetta(DE3)中,经原核表达优化后,诱导β-catenin蛋白表达,以SDS-PAGE和Western blot实验进行鉴定.采用亲和层析方法分离纯化β-catenin蛋白,以荧光偏振实验进行生物学活性鉴定.用β-catenin蛋白为抗原免疫大鼠制备多克隆抗体,随后采用ELISA和Western blot实验检测多克隆抗体的效价和抗原特异性.结果:成功进行了β-catenin蛋白的原核表达与分离纯化.荧光偏振实验表明纯化的β-catenin蛋白具有良好的生物学活性.ELISA实验表明抗人β-catenin多克隆抗体效价可达1:128000.Western blot实验证实抗人β-catenin多克隆抗体具有良好的抗原特异性.结论:成功进行了大鼠抗人β-catenin多克隆抗体的制备与鉴定,为深入研究β-catenin的生物学功能奠定了实验基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘晓平	皖南医学院药物筛选与评价研究所	41	216	9.0	13.0
2	陈云雨	皖南医学院药物筛选与评价研究所	7	15	3.0	3.0
3	牛夏忆	皖南医学院药物筛选与评价研究所	5	15	3.0	3.0
4	李淼	皖南医学院药物筛选与评价研究所	3	8	2.0	2.0
5	张倩	皖南医学院药物筛选与评价研究所	5	16	2.0	4.0