人源抗戊型肝炎病毒单克隆抗体的获得与鉴定

• 作者: 孟继鸿 张建琼 谢维 魏华 鲁晓萱 鲍海逊
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 戊型肝炎病毒 噬菌体展示 抗体库
• 年，卷（期）: 2004,（3）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 198-201
• 页数: 4页
• 分类号: R392
• 字数: 4081字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2004.03.011

摘要

目的获得人源中和性抗戊型肝炎病毒(HEV)单克隆基因工程抗体. 方法采用五轮筛选法(逐轮降低抗原包被量,严格洗脱条件),以固相化的4种含中和抗原表位的HEV 代表株ORF2重组混合抗原淘筛本室构建的HEV 患者外周血源的噬菌体抗体库.获得有特异结合活性的噬菌体抗体,酶切鉴定抗体基因插入.切去噬菌粒上衣壳蛋白gⅢ基因构建表达载体,在大肠杆菌中可溶性表达抗HEV抗体Fab段,ELISA、Western blot检测抗体免疫学活性;测序分析抗体基因. 结果筛选出4株与含中和抗原表位的HEV代表株ORF2重组混合抗原特异结合而与BSA、HBsAg无交叉结合反应的噬菌体抗体,可能为中和抗体.切去gⅢ基因,在大肠杆菌中表达可溶性抗体Fab段,表达量在细菌培养液上清和细菌裂解液中差异无显著性.可溶性抗体与含中和抗原表位的HEV ORF2重组混合抗原有特异结合活性,与BSA、HBsAg无交叉结合反应.Western blot显示在相对分子质量(Mr)略大于45×103处有一明显条带,与Mr 48×103的Fab大小一致.DNA测序分析表明,Fab段VH属于IgG VH3基因家族,VL属于Vκ1基因家族. 结论利用噬菌体抗体库技术成功获得抗HEV的人源单克隆抗体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	孟继鸿	东南大学医学院微生物与免疫学教研室	43	346	9.0	17.0
2	魏华	东南大学医学院遗传学研究中心	6	20	3.0	4.0
3	张建琼	东南大学医学院遗传学研究中心	42	104	6.0	8.0
4	谢维	东南大学医学院遗传学研究中心	26	205	7.0	13.0
5	鲁晓萱	东南大学医学院遗传学研究中心	9	93	6.0	9.0
6	鲍海逊	东南大学医学院遗传学研究中心	2	3	1.0	1.0