DAPK1基因开放读码序列的克隆、序列分析及诱导Raji细胞凋亡

• 作者: 吉琼梅 张海涛 朱振宇 李民友 李秀英 梁念慈 马涧泉
• 来源期刊: 中国病理生理杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 死亡相关蛋白激酶 细胞凋亡 甲基化 Raji细胞 K562细胞
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 88-93
• 页数: 6页
• 分类号: R363
• 字数: 3539字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-4718.2004.01.020

摘要

目的:探讨死亡相关蛋白激酶(DAPK1)在肿瘤的形成、转移中所起作用,克隆DAPK1基因的开放读码序列(ORF).方法:根据GenBank提供的核苷酸序列,自行设计引物,用RT-PCR从K562细胞中扩增DAPK1基因的ORF;用质脂体将pcDNA3.1(+)-DAPK1转染到Raji细胞,Hoechst 33258染色观察细胞凋亡,MTT法观察DAPK1基因对细胞生存的影响.结果:DAPK1基因的ORF克隆到质粒pMD18-T,测序鉴定;分析结果显示,从K562细胞成功扩增 4 300 bp的DAPK1基因ORF有7处突变,其中6处是同义突变,1处是基因的单链核苷酸多态性;DAPK1基因的ORF克隆到真核表达载体pcDNA3.1(+),转化到Raji细胞;转染48 h后,可以检测到DAPK1的表达,并可以观察到细胞发生凋亡.结论:大片段的基因可以采用RT-PCR法直接克隆,采用常规的转染技术可以将大片段基因转染到宿主细胞;成功克隆具有活性功能DAPK1基因ORF,过表达的DAPK1基因可以诱导Raji细胞凋亡.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李秀英	中山大学中山医学院生化教研室	15	75	5.0	8.0
2	朱振宇	中山大学中山医学院生化教研室	51	397	8.0	18.0
3	张海涛	中山大学中山医学院生化教研室	64	399	11.0	16.0
7	李民友	中山大学中山医学院生化教研室	8	33	3.0	5.0
8	马涧泉	中山大学中山医学院生化教研室	12	52	4.0	7.0
9	吉琼梅	中山大学中山医学院生化教研室	5	25	2.0	5.0