通用腺相关病毒载体构建及表达报告基因GFP的研究

• 作者: 吴江 杨宇 杨广笑 王全师 胡林森 胡海涛
• 来源期刊: 中风与神经疾病杂志
• 学科: 生物学
• 关键词: 重组腺相关病毒 载体 报告基因 基因治疗 星形胶质细胞
• 年，卷（期）: 2004,（1）
• 所属期刊栏目: 论著与经验总结
• 页码范围: 10-12
• 页数: 4页
• 分类号: Q344
• 字数: 2823字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1003-2754.2004.01.003

摘要

目的构建基因治疗通用型AAV载体并检测它转导外源基因作用.方法使用限制性内切酶切出pSSV9int-质粒中的AAV病毒Rep和Cap基因元件后,插入了重组腺病毒专用穿梭质粒-pACCMVpLpA的含有CMV启动子、多克隆位点(MCS)和多聚腺苷酸信号(PolyA)的表达盒,构建了重组AAV通用载体质粒pSSHG-CMV.在该质粒MCS插入GFP基因后,我们使用pSSHG-CMV-GFP、pGF140和pAAV/Ad 3种质粒共转染293包装细胞,制备GFP重组AAV,应用斑点杂交实验检测重组病毒滴度度,并将该病毒感染新生大鼠星形胶质细胞,荧光显微镜观察GFP表达.结果重组AAV的滴度在浓缩前可达2×1011,浓缩后可达2×1013,表明成功的构建了重组AAV载体,插入外源基因GFP后,在包装病毒和辅助质粒的联合作用下,能产生具有感染性的重组AAV.感染了重组GFP-AAV的大鼠星形胶质细胞表达了明显的GFP荧光.结论本文构建的重组AAV通用载体pSSHG-CMV,可转导外源基因,用于基因治疗的研究.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	胡海涛	西安交通大学解剖教研室	93	590	12.0	18.0
2	胡林森	吉林大学第一医院神经内科	56	243	8.0	13.0
3	杨广笑	西安交通大学解剖教研室	11	47	4.0	6.0
4	杨宇	吉林大学第一医院神经内科	58	203	7.0	11.0
5	吴江	吉林大学第一医院神经内科	157	910	16.0	22.0
6	王全师	西安交通大学解剖教研室	3	16	2.0	3.0