重组人骨形态发生蛋白7基因腺相关病毒载体的构建及其体外生物学活性

• 作者: 党晓谦 强辉 时志斌 樊立宏 王坤正
• 来源期刊: 西安交通大学学报（医学版）
• 关键词: 人骨形态发乍蛋白7 腺相关病毒 基因转染
• 年，卷（期）: 2010,（5）
• 页码范围: 573-577
• 分类号: Q812
• 语种: 中文

摘要

目的 构建带有绿色荧光蛋白(GFP)标记并携带人骨形态发生蛋白7(hBMP-7)基因的无致病性重组的腺相关病毒(AAV),以其作为基因载体感染兔骨髓基质干细胞(BMSCs),体外检测病毒佳物学活性及功能.方法 从含有hBMP-7基因的pBluescript KS-hBMP7质粒中扩增出hBMP-7片段,构建莺组骨架质粒pAAV-hBMP7-IRES-GFP.将此质粒和AAV包装质粒pAAV-RC、辅助质粒pAAV-Helper共转染AAV-293细胞,通过同源重组产生重组腺相关病毒rAAV-hBMP7-IRES-GFP.感染AAV-HT1080测定病毒滴度,应用该莺组病毒感染体外堵养的兔BMSCs,荧光细胞计数法检测病毒最佳感染复数,Western blot法检测BMP-7基因的体外表达,成骨诱导实验检测BMP-7的体外生物学活性.结果 重组腺相关病毒表达质粒经酶切、测序验证正确.重组腺相关病毒感染滴度约为3.6×1011v.P./mL.重组病毒感染兔BMSCs的最佧感染复数为5X104v.p/细胞.Western blot结果显示重组病毒rAAv-hBMP7-IRES-GFP转染组BMSCs细胞内有BMP表达.成骨诱导实验证实rAAV-hBMP7-IRES-GFP表达的BMP体外具有良好的成骨活性.结论 成功制备了 rAAV-hBMP7-IRES-GFP病毒,实验获得的病毒载体滴度高、感染性好.可以满足骨组织工程的需要,为进一步体内和体外研究基因治疗促进骨愈合提供了有利的工具.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王坤正	西安交通大学医学院第二附属医院骨科	404	3247	26.0	38.0
2	樊立宏	西安交通大学医学院第二附属医院骨科	33	126	6.0	10.0
3	党晓谦	西安交通大学医学院第二附属医院骨科	152	970	15.0	23.0
4	时志斌	西安交通大学医学院第二附属医院骨科	86	835	15.0	26.0
5	强辉	西安交通大学医学院第二附属医院骨科	14	129	8.0	11.0