重组人骨形态发生蛋白7腺病毒载体构建及在原代培养兔髓核细胞中的表达

• 作者: 侯铁胜 李春青 石健 赵新刚 黄盛东 龚德军
• 来源期刊: 中国组织工程研究与临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨形态发生蛋白7 腺病毒 基因工程 髓核细胞 表达 组织构建
• 年，卷（期）: 2008,（28）
• 所属期刊栏目: 技术与方法
• 页码范围: 5477-5481
• 页数: 5页
• 分类号: R681.5
• 字数: 6472字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2008.28.023

摘要

目的:研究表明,外源性重组骨形态发生蛋白7具有促进椎间盘细胞增殖以及促进细胞外基质合成的能力,为探讨骨形态发生蛋白7基因疗法治疗椎间盘退变的可行性,本实验拟构建重组人骨形态发生蛋白7的腺病毒载体,并观察其在原代培养的兔椎间盘髓核细胞中的表达情况.方法:实验于2005-12/2006-06在长海医院胸心外科研究所完成.从整合有人骨形态发生蛋白7全长cDNA的真核表达质粒pcDNA3.1(+)-骨形态发生蛋白7中聚合酶链反应扩增骨形态发生蛋向7基因的开放读码框,通过穿梭质粒整合到腺病毒载体pAd-Easy系统上,在293细胞中包装成熟、扩增,酶切鉴定人骨形态发生蛋白7基因整合到该载体中;该载体转染原代培养的兔髓核细胞,并采用反转录-聚合酶链反应和蛋白免疫印迹的方法检测其表达情况.结果:①实验成功建立了安全、稳定、有效的复制缺陷重组腺病毒Ad-骨形态发生蛋白7的构建方法,经鉴定后证实有骨形态发生蛋白7全长cDNA整合,并且为正向插入.②体外培养的兔原代髓核细胞表现出代谢活性低、增殖能力弱等特点;髓核细胞能够被腺病毒载体高效感染并能够高效表达不同的目的基因,感染效率随感染倍数值的增加而增加;当感染倍数=100时,95%以上的髓核细胞可以被感染,且细胞毒性较小,为最佳感染倍数.③采用最佳感染倍数转染髓核细胞后骨形态发生蛋白7基因在转染后3 d就开始表达,并可以持续表达3周以上,几乎所有髓核细胞都可以表达骨形态发生蛋白7.结论:腺病毒载体可以作为进行骨形态发生蚩白7基因治疗椎间盘退变研究的有效载体.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	侯铁胜	上海长海医院骨科	54	503	13.0	20.0
2	赵新刚	上海长海医院骨科	5	21	3.0	4.0
3	李春青	解放军第五三三医院外一科	14	25	4.0	5.0
4	石健	解放军第五三三医院外一科	5	12	3.0	3.0
5	黄盛东	上海长海医院胸心外科研究所	1	3	1.0	1.0
6	龚德军	上海长海医院胸心外科研究所	2	3	1.0	1.0