人骨形态发生蛋白7重组腺病毒的构建及鉴定

• 作者: 吴岳嵩 徐卫东 毕霞
• 来源期刊: 中国临床康复
• 学科: 医学
• 关键词: 骨形态发生蛋白质类/分析 腺病毒科 基因表达 转染
• 年，卷（期）: 2006,（17）
• 所属期刊栏目: 组织工程研究
• 页码范围: 116-118
• 页数: 3页
• 分类号: R318
• 字数: 3071字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1673-8225.2006.17.051

摘要

目的:采用多聚酶链反应及酶切鉴定,拟构建人骨形态发生蛋白7重组腺病毒载体,以便利用局部基因治疗方法进一步在体内获得重组人骨形态发生蛋白7.方法:实验于2004-05/2005-10在解放军第二军医大学长海医院胸心外科研究所完成.含人骨形态发生蛋白7基因全长cDNA质粒pUC118.BMP-7由第一作者构建并保存.将人骨形态发生蛋白7基因克隆至pcDNA3.1/CT-GFP质粒中,酶切回收的BMP-7/GFP基因片段,克隆入pAxCAwt腺病毒载体后,共转染大肠杆菌LE393,获得腺病毒重组质粒,大量扩增后转入293细胞包装,获得重组腺病毒.用病毒上清液感染293细胞及Hela细胞,293细胞受病毒感染而Hela细胞无明显病毒感染现象的克隆初步判定为重组腺病毒株.结果:①骨形态发生蛋白7基因的获得:KpnI及XbaI双酶切、琼脂凝胶电泳检测可见2条带,略小于500 bp的条带是长度为430 bp的骨形态发生蛋白7基因,略大于2 500bp的条带是长度约为2 600 bp的pUC118.②重组质粒pcDNA3.1 BMP-7/GFP的构建:所挑选的5个转化子均可见略大于1000 bp的条带,全部为阳性克隆.③重组粘粒pAxCAwT.BMP-7.GFP的构建:所挑选的5个转化子中2个可见大于1 000 bp的条带,为正向插入的阳性克隆.结论:多聚酶链反应及酶切鉴定证明骨形态发生蛋白7重组腺病毒载体的成功构建,并包装出重组腺病毒,为骨损伤疾病进行原位组织工程修复奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	毕霞	解放军第二军医大学长海医院康复医学科	10	69	5.0	8.0
2	吴岳嵩	解放军第二军医大学长海医院骨科	10	47	4.0	6.0
3	徐卫东	解放军第二军医大学长海医院骨科	30	145	6.0	10.0