热点突变法提高人源抗TNF-α抗体的亲和力

• 作者: 周丽君 张达矜 曲佳 汪保安 王欲晓 王琰 陈晓穗
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 抗体库 亲和力成熟 人源抗体 TNF-α
• 年，卷（期）: 2004,（8）
• 所属期刊栏目: 抗体工程
• 页码范围: 644-648
• 页数: 5页
• 分类号: R3
• 字数: 5727字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2004.08.020

摘要

目的通过热点突变法对一株人源抗TNF-α ScFv进行体外亲和力成熟.方法根据体内抗体亲和力成熟时V基因体细胞突变的热点,设计引物进行多步重叠PCR,在本株ScFv的H-CDR3和L-CDR3热点部位引入随机突变,构建噬菌体抗体库,采用硫氰酸盐洗脱法对抗体库进行筛选,对选出的克隆测定其相对亲和力,并进一步将4株转换表达成为可溶性Fab,以非竞争ELISA法测定其亲和常数.结果构建了库容为1.8×107的热点突变抗体库,筛选得到了多株亲和力明显提高的抗TNF-α抗体的突变体(最多达10倍).结论热点突变法是体外提高抗体亲和力的有效和可行的方法.