丙肝病毒全基因组cDNA克隆侵染细胞培养体系的建立

• 作者: 姚相杰 屈三甫 方呈祥 李中红 李信墙 李卫云 郑从义 郭佳 陈震球
• 来源期刊: 科学通报
• 学科: 医学
• 关键词: 丙型肝炎病毒(HCV) 全基因组 侵染性cDNA克隆 重组痘病毒 细胞培养体系
• 年，卷（期）: 2004,（10）
• 所属期刊栏目: 论文
• 页码范围: 965-970
• 页数: 6页
• 分类号: R5
• 字数: 5733字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0023-074X.2004.10.010

摘要

以含有丙肝病毒全基因组cDNA的重组质粒(pHCV)为材料, 通过基因转染、重组痘病毒辅助使之在HeLa细胞中表达HCV病毒体, 建立了一种新的HCV体外细胞培养系统. 采用RT-PCR, 荧光定量RT-PCR, 链特异性RT-PCR, 免疫印迹, 免疫电子显微镜和电子显微镜负染技术跟踪检测HCV的增殖效率, 结果显示, 该培养体系中有HCV正链RNA的合成和HCV结构蛋白、非结构蛋白的表达, 并组装成直径约47 nm的HCV病毒体, 病毒体可被偶联有胶体金的抗HCV结构蛋白E2的单抗标记; 该体系产生的HCV病毒体滴度达107基因拷贝/mL, 远远高于病人血清中的HCV基因拷贝数, 也高于迄今报道的任何一种HCV细胞培养体系的病毒滴度. 检测结果证明, 转染细胞裂解上清中的HCV病毒体可以感染肝癌细胞系Huh7, 并在感染细胞中增殖和合成负链RNA中间体, 病毒滴度达106基因拷贝/mL.