pcDNA3-TIMP-2的构建与表达

• 作者: 丁弘毅 徐依敏 林旭 汤大鸣 王彬尧 王长谦 王顺 谢秀兰 黄定九
• 来源期刊: 上海第二医科大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 组织金属蛋白酶活性抑制物 基因克隆 基因转染
• 年，卷（期）: 2004,（6）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 413-416,420
• 页数: 5页
• 分类号: R782|R786
• 字数: 3650字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-8115.2004.06.001

摘要

目的构建TIMP-2基因的真核表达载体pcDNA3-TIMP-2,并探讨其体外表达效果.方法应用已克隆得到的人TIMP-2基因和分子克隆技术构建pcDNA3-TIMP -2,酶切鉴定,并用体外培养人THP-1细胞,电穿孔转入pcDNA3-TIMP-2,RT PCR和Western blotting分别检测外源基因转染效果,Zymography检测培养上清MMPs活性.结果构建pcDNA3-TIMP-2经酶切和测序鉴定正确,电穿孔法导入体外培养人THP 1细胞后,TIMP-2 mRNA约增加2.8倍,TIMP 2 蛋白表达增加约2.7倍,MMP-2和MMP-9的活性分别约为对照组的32%和28%.结论成功构建了pcDNA3-TIMP-2,且证实有良好的体外转染和表达效果,为进行转移TIMPs基因抑制MMPs及探讨其与动脉粥样硬化等多种病理过程的关系奠定基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	王长谦	上海第二医科大学仁济医院心内科	56	375	11.0	16.0
2	王彬尧	上海第二医科大学仁济医院心内科	75	452	13.0	17.0
3	林旭	福建医科大学第一附属医院肿瘤放疗科	71	526	12.0	20.0
4	王顺	福建医科大学第一附属医院肿瘤放疗科	7	19	2.0	4.0
5	谢秀兰	上海第二医科大学仁济医院心内科	10	101	6.0	10.0
6	汤大鸣	上海第二医科大学仁济医院心内科	4	12	2.0	3.0
7	丁弘毅	上海第二医科大学仁济医院心内科	7	59	5.0	7.0
8	徐依敏	上海第二医科大学仁济医院心内科	7	59	5.0	7.0