人pcDNA3.1-TPX2真核表达载体的构建与表达

• 作者: 刘海波 刘玉含 刘红春 寇洁 王秀林
• 来源期刊: 郑州大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: TPX2基因 原核表达载体pQE-70 真核表达载体pcDNA3.1 EC9706细胞
• 年，卷（期）: 2012,（2）
• 所属期刊栏目: 食管癌研究
• 页码范围: 144-147
• 分类号: R735.1
• 字数: 2243字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-6825.2012.02.002

摘要

目的:构建TPX2的真核表达载体pcDNA3.1-TPX2,并观察其在食管癌EC9706细胞中的表达.方法:在pQE-70-TPX2原核表达载体基础上,根据GenBank上提供的TPX2基因序列及测序结果,采用Primer Premier 5.0软件设计扩增TPX2基因编码区的引物序列,经HindⅢ和BamHⅠ双酶切,与真核表达载体pcDNA3.1连接后转化感受态大肠杆菌JM109,并进行酶切分析和序列测定.将构建的质粒pcDNA3.1-TPX2体外转染EC9706细胞,进行稳定筛选.用Western blot鉴定基因的表达.结果:DNA测序和BLAST比对表明克隆的人TPX2基因序列正确,进一步酶切分析显示,成功构建了真核表达载体pcDNA3.1-TPX2,并在EC9706细胞中获得稳定表达.结论:TPX2基因真核表达载体的成功构建为后续研究TPX2基因在肿瘤细胞中的功能奠定了基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	刘红春	郑州大学第一附属医院检验科	69	369	10.0	16.0
2	寇洁	河南省人民医院心血管内科	19	129	6.0	11.0
3	刘玉含	郑州人民医院检验科	9	5	1.0	1.0
4	王秀林		19	60	4.0	7.0
5	刘海波	郑州大学第一附属医院检验科	3	11	1.0	3.0