重组人白细胞介素10在毕赤酵母中的表达及生物学活性测定

• 作者: 井申荣 刘开云 曾韦锟 毛旭虎 邹全明
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 白细胞介素10 毕赤酵母 分泌表达 生物学活性
• 年，卷（期）: 2005,（9）
• 所属期刊栏目: 检测技术
• 页码范围: 773-776
• 页数: 4页
• 分类号: R3
• 字数: 2369字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j:issn:0254-5101.2005.09.023

摘要

目的在毕赤酵母中分泌表达具有生物学活性的重组人白细胞介素10(rhIL-10),用于IL-10的生理功能研究和动物试验.方法通过PCR扩增IL-10基因,插入到重组质粒α/pUC18的α因子信号序列的XhoⅠ和EcoRⅠ酶切位点处,再将融合基因αIL-10重组到表达质粒pPIC9K的BamHⅠ和EcoRⅠ之间,SalⅠ酶切线性化重组质粒IL-10/pPIC9K,电穿孔转化毕赤酵母,营养缺陷型培养基MD和G418筛选含高拷贝表达盒的酵母转化子,PCR鉴定是否含有目的基因IL-10,甲醇诱导rhIL-10的表达,SDS-PAGE和Western blot鉴定目的蛋白,用ELISA定量测定及MC/9细胞分析IL-10生物学活性.结果成功构建了重组表达质粒IL-10/pPIC9K,获得了4个含IL-10基因的高拷贝毕赤酵母转化子,甲醇诱导后,在摇瓶水平的IL-10表达量为(0.627±0.09)mg/L,比活性为1.5×105U/mg.结论毕赤酵母分泌表达的IL-10具有良好的生物学活性.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	井申荣	昆明理工大学生物工程技术研究中心	89	229	8.0	12.0