重组腺病毒Ad/siRNA/环氧合酶-2的构建及其抑制食管癌细胞的效果

• 作者: 赵晖 顾晓萌
• 来源期刊: 中华消化杂志
• 学科: 医学
• 关键词: RNA干扰 环氧合酶-2沉默 食管肿瘤 细胞生长
• 年，卷（期）: 2005,（12）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 733-736
• 页数: 4页
• 分类号: R73
• 字数: 3143字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/j.issn:0254-1432.2005.12.009

摘要

目的观察腺病毒介导的RNA干扰(RNAi)技术对人食管鳞癌细胞(Eca-109)环氧合酶(COX)-2基因表达的抑制效果及其对Eca-109细胞生长的影响.方法采用含RNA聚合酶Ⅲ启动子H1的质粒pSUPER构建针对人COX-2 mRNA的重组质粒psiRNA/COX-2.Not Ⅰ和Xho Ⅰ双酶切psiRNA/COX-2得到siRNA/COX-2表达片段,定向克隆至腺病毒穿梭质粒pAdTrack的相同位点得到pAdTrack/siRNA/COX-2,后者与骨架质粒pAdEasy-1在大肠杆菌BJ5183中同源重组得到腺病毒Ad/siRNA/COX-2,经293细胞包装、扩增后转染Eca-109细胞.ELISA法测定培养液上清的前列腺素(PG)E2浓度,PCR法检测细胞COX-2 mRNA水平,流式细胞仪检测细胞凋亡与周期分布,绘制细胞生长曲线.结果重组腺病毒Ad/siRNA/COX-2构建成功,转染Eca-109细胞后,细胞COX-2 mRNA水平下降71.7%(P＜0.01),培养液上清PGE2浓度下降62.0%(P＜0.01);细胞生长明显减缓,G0-G1期细胞比例增加、S期与G2-M期细胞比例减少(P＜0.01),细胞凋亡增多(P＜0.01).结论腺病毒介导的RNAi技术可显著抑制人食管鳞癌细胞COX-2基因表达,从而导致肿瘤细胞增殖减缓、凋亡增加.