固定剂和固定时间对石蜡包埋组织RT-PCR检测病毒RNA的影响

• 作者: 蒙艳斌 蒲爱华 贺莉萍 郭毅 陈湘宜
• 来源期刊: 国外医学(流行病学传染病学分册)
• 关键词: 组织保存 RNA病毒 石蜡包埋 固定剂
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 11-15
• 页数: 5页
• 字数: 3264字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.issn.1673-4149.2005.01.004

摘要

目的探讨固定剂及固定时间对石蜡包埋RNA病毒感染组织中RNA降解及标本病理形态学的影响.方法取汉坦病毒76～118株接种的乳鼠感染组织,以沉淀脱水类固定剂100%甲醇、75%乙醇、100%丙酮以及醛类固定剂4%的多聚甲醛磷酸缓冲液(PFA)、10%福尔马林共5种固定剂,在室温下固定病毒感染组织6h、12h、24h和48h后,将各种方式固定后的病毒感染组织标本进行石蜡包埋,组织包埋块在室温下保存1年～1.5年,然后进行切片HE染色,镜下观察各种固定剂对组织病理形态学的影响.各种方式固定后石蜡包埋组织中以RT-PCR扩增出不同片段长度的病毒RNA及β-actin RNA序列,以判断各种固定方式对病毒RNA和细胞总RNA降解的影响.每种固定方法对RNA的影响是通过获得产物最大长度或对长片段扩增的可重复性及假阴性结果的多少来反映.结果病理切片结果显示,经10%福尔马林和4%PFA固定的石蜡切片,组织结构完整清晰,组织经其他三种沉淀脱水类固定剂固定后有不同程度收缩,但不影响组织病理形态学检测,其中甲醇固定的收缩程度最小.从固定后石蜡包埋组织中提取RNA进行RT-PCR扩增时,扩增的效果受固定剂类型和固定时间的影响,同时也受扩增的基因片段长度的影响.在可达到固定作用的前提下,同一固定剂固定时间越短,RT-PCR扩增结果越稳定;采用相同的固定时间从甲醇、乙醇及丙酮等沉淀类固定剂固定后石蜡包埋的病毒组织中扩增出病毒RNA的阳性结果比醛类剂高,可重复性好.尤其在进行长片段扩增时,在沉淀类固定剂固定的标本中出现假阴性现象比醛类固定剂固定的标本少.各种沉淀固定剂之间无明显区别.结论从固定后石蜡包埋组织标本中用RT-PCR检测病毒RNA进行回顾性研究是可行的,但受固定剂类型及固定持续时间的影响.临床在对存档的石蜡包埋组织作回顾性研究,解释其PCR阴性结果时,有必要考虑其组织标本固定对RNA分子的影响这一因素.