尼罗罗非鱼肝cDNA文库的构建

• 作者: 何学军 李思发
• 来源期刊: 上海水产大学学报
• 学科: 农学
• 关键词: 尼罗罗非鱼 肝 cDNA文库
• 年，卷（期）: 2005,（4）
• 页码范围: 353-358
• 页数: 6页
• 分类号: S917
• 字数: 3688字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1004-7271.2005.04.001

摘要

用Stratagene技术构建了吉富品系尼罗罗非鱼(Oreochromis niloticus, GIFT strain)肝cDNA文库.首先用TRIZOL法提取肝总RNA,经琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度检测,表明总RNA纯度高且完整性良好.然后分离纯化mRNA,合成双链cDNA之后,加EcoRⅠ接头、EcoRⅠ末端磷酸化、XhoⅠ消化,并用葡聚糖凝胶柱层析分级收集cDNA样品,得到300 mg cDNA,符合建库要求.双链cDNA与Uni-ZAP XR Vector连接后,用GigapackⅢGold Packaging Extract进行体外包装得到cDNA文库.测得的文库滴度为1.25×107 pfu/mL,文库噬菌体的滴度符合文库保存和筛选实验的要求.随机挑选20个阳性单克隆噬菌斑进行PCR鉴定后,得出文库的重组率达100%,扩增出的片段主要集中在0.5～2 kb之间,平均插入片段长度约为1.05 kb,结果说明本实验所构建的cDNA文库质量较高.取扩增文库80 μL进行体外切割,约含3.6×106个重组子,切割后phagemid量为2.0×106,切割效率为79.4%.经抽提质粒获得质粒DNA约1.2 mg.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	李思发	上海水产大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室	78	1770	26.0	39.0
2	何学军	上海水产大学农业部水产种质资源与养殖生态重点开放实验室	6	166	6.0	6.0