利用不相容质粒共转化大肠杆菌对Cre重组酶体内重组活性的可视检测

• 作者: 庞永奇 方荣祥 贾洪革 郭蔼光 陈晓英
• 来源期刊: 微生物学报
• 学科: 生物学
• 关键词: Cre重组酶 共转化 不相容性质粒 绿色荧光蛋白
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 研究简报
• 页码范围: 125-128
• 页数: 4页
• 分类号: Q93
• 字数: 3647字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0001-6209.2005.01.028

摘要

源自噬菌体P1的Cre重组酶可以识别34bp的靶DNA序列loxP,进行位点特异性的重组反应.为了简便地检测Cre酶在大肠杆菌中的重组活性,分别将cre基因和上下游带有loxP的绿色荧光蛋白基因(gfp)克隆到具有不同抗性的两种不相容质粒中,然后将构建的原核表达载体pET30a-Cre和pET23b-loxGFP电击共转化大肠杆菌BL21(DE3),利用卡那霉素和氨苄青霉素双抗生素抗性进行筛选.通过直接观察转化子的绿色荧光,便可以显示Cre酶的体内重组活性,并进一步通过SDS-PAGE分析、质粒酶切鉴定进行了验证.结果表明:以gfp为报告基因、通过两种不相容质粒共转化大肠杆菌可以为研究和改进Cre/loxP重组系统提供一种简便直观的检测方法.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	方荣祥	中国科学院微生物研究所植物基因组学国家重点实验室	26	340	9.0	18.0
2	郭蔼光	西北农林科技大学生命科学学院	110	1264	19.0	27.0
3	陈晓英	中国科学院微生物研究所植物基因组学国家重点实验室	11	118	6.0	10.0
4	贾洪革	中国科学院微生物研究所植物基因组学国家重点实验室	3	63	3.0	3.0
5	庞永奇	中国科学院微生物研究所植物基因组学国家重点实验室	3	63	3.0	3.0