r-PA真核表达载体的构建与鉴定

• 作者: 孙石静 孙雄华 廖建民 张新元 沈子龙
• 来源期刊: 药物生物技术
• 学科: 生物学
• 关键词: 瑞替普酶 构建 真核表达载体 海带
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 152-157
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 2266字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-8915.2005.03.004

摘要

用SV40和CaMV 35S两种启动子分别启动瑞替普酶(reteplase,r-PA)和标记基因bar基因,构建能在海带中表达外源基因的重组表达载体.通过PCR方法扩增CaMV 35S启动子、bar基因和r-PA基因,将扩增的3个片段分别克隆到pGEM-T Easy Vector上.将CaMV片段亚克隆到pCAT3-control载体上得到重组质粒pCAT/CaMV;再将bar基因切下插入到CAT/CaMV上得到重组质粒pCAT/C-B,最后将rPA基因片段切下后插入到pCAT/C-B上获得重组质粒pSVrPA/C-B.PCR、酶切及测序结果均表明已成功扩增出CaMV 35S、r-PA和bar基因片段,并已顺次正确插入到真核表达载体PCAT3-control上,最终成功构建了能在海带中表达r-PA的真核表达载体,用基因枪法转入海带中表达,FAPA法测定得到有体外纤溶活性的阳性海带,为后续研究工作打下坚实的基础.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	沈子龙	中国药科大学生物技术中心	86	688	11.0	23.0
2	孙石静	中国药科大学生物技术中心	5	26	4.0	5.0
3	廖建民	中国药科大学生物技术中心	27	390	7.0	19.0
4	张新元	中国药科大学生物技术中心	7	44	5.0	6.0
5	孙雄华	中国药科大学生物技术中心	4	19	3.0	4.0