具有潮霉素B抗性的NIH3T3细胞饲养层的制备

• 作者: 于洋 周生来 张梅英 李华 杨葳 汪瑛 王太一 王惟 王禄增 秦英 董婉维
• 来源期刊: 实验动物与比较医学
• 学科: 生物学
• 关键词: NIH3T3细胞 潮霉素B磷酸转移酶基因 转染 潮霉素B抗性 ES细胞
• 年，卷（期）: 2005,（3）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 131-135
• 页数: 6页
• 分类号: Q95-33
• 字数: 3984字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-5817.2005.03.001

摘要

目的建立具有潮霉素B(hygromycin B)抗性的3T3细胞系,用于转染目的基因(pTRE2-human-Ins)的ES阳性细胞克隆筛选的饲养层.方法通过脂质体转染的方法,将含有潮霉素B磷酸转移酶基因(hyg)的质粒pHyg导入NIH3T3细胞中,利用潮霉素B的药物选择特性,对转染细胞进行压力筛选,并对其进行PCR和Southern blot鉴定.结果经300μg/ml的潮霉素B压力筛选后,获得了抗性细胞克隆.抗性NIH3T3细胞的形态和生长速度与正常NIH3T3细胞没有差异,特异性核苷酸引物检测抗性细胞基因组DNA,可以扩增出相应的核苷酸片段,Southern blot鉴定结果表明潮霉素基因片段已整合入潮霉素抗性NIH3T3细胞.结论本实验通过脂质体介导的方法成功地培育了潮霉素B抗性的NIH3T3细胞,为进行目的基因(pTRE2-human-Ins)转染ES细胞的阳性细胞克隆筛选打下了基础.