猪IFNα基因在毕赤酵母中的高效分泌表达

• 作者: 于瑞嵩 刘惠莉 张德福 曹祥荣 李震 谢蓓 黄海
• 来源期刊: 遗传
• 学科: 生物学
• 关键词: 猪IFNα 巴斯德毕赤酵母 基因重组 分泌表达
• 年，卷（期）: 2005,（2）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 215-220
• 页数: 6页
• 分类号: Q78
• 字数: 5303字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:0253-9772.2005.02.009

摘要

巴斯德毕赤酵母载体质粒pPICZαA含有强启动子PAOXI和α-MF信号肽序列,构建猪IFNα基因的重组质粒pPICZαA-IFNα,并转入E.coli JM109中,得到转猪IFNα基因工程菌,经酶切鉴定克隆到载体pPICZαA上的外源基因即为猪IFNα基因.通过电击将经SαcⅠ酶切后线性化的pPICZαA-IFNα质粒转化到巴斯德毕赤酵母KM71中.SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物的结果表明,分泌于胞外的猪IFNα蛋白分子量比猪IFNα理论值分子量稍大,估计是糖基化的原因.表达的蛋白可发生正确的抗原-抗体反应,表达量为0.45mg/mL.将蛋白表达上清经细胞毒性实验检测表达产物的抗病毒活性为2.1×104IU/mL.