bcr/abl特异性siRNA真核表达载体的构建及鉴定

• 作者: 刘霆 孟文彤 席亚明 汪宇辉 陆晓茜 顾玲 龚玉萍
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 慢性髓细胞性白血病 bcr/abl融合基因 真核表达载体 RNA干扰 K562
• 年，卷（期）: 2005,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 460-463
• 页数: 4页
• 分类号: R733.7
• 字数: 3186字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2005.04.003

摘要

目的构建bcr/abl的特异性siRNA真核细胞表达载体,并初步探索对K562细胞bcr/abl mRNA和P210蛋白的影响.方法根据GenBank数据库提供的bcr/abl基因核苷酸序列,按照Tuschl设计原则,选择设计双链小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),再转化为能表达其小发卡结构RNA(small hairpin RNAs,shRNA)的DNA序列,并与pTER质粒定向连接,构建受控于人RNA聚合酶Ⅲ启动子H1的真核表达载体pTER117、pTER363,经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定;在脂质体的介导下转染K562细胞,用RT-PCR分析bcr/abl mRNA的表达,细胞化学染色检测P210蛋白的表达.结果构建bcr/abl融合基因siRNA真核表达载体pTER117、pTER363,经限制性内切酶酶切和DNA测序证实与设计完全一致,转染K562细胞24 h后,pTER117、pTER363分别使bcr/abl mRNA的相对水平下降52%、43%,使P210蛋白分别下降47%、40%. 结论bcr/abl融合基因siRNA真核细胞表达载体构建成功,并有效干扰K562细胞bcr/abl的表达.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	席亚明	四川大学华西医院血液科	10	77	5.0	8.0
2	刘霆	四川大学华西医院血液科	143	697	13.0	20.0
3	顾玲	四川大学华西医院血液科	21	38	4.0	4.0
4	孟文彤	四川大学华西医院血液科	59	403	11.0	18.0
5	龚玉萍	四川大学华西医院血液科	33	104	6.0	7.0
6	陆晓茜	四川大学华西医院血液科	23	93	5.0	9.0