杂种和纯种猪之间脂肪组织差异表达基因的分离、克隆和序列分析

• 作者: 任竹青 姜勋平 左波 李凤娥 熊远著 蒋思文 邓昌彦 郑嵘 雷明刚
• 来源期刊: 农业生物技术学报
• 学科: 农学
• 关键词: EST 杂种优势 mRNA差异显示 半定量RT-PCR 猪
• 年，卷（期）: 2005,（5）
• 所属期刊栏目: 研究论文
• 页码范围: 601-607
• 页数: 7页
• 分类号: S8
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-7968.2005.05.012

摘要

实验选取中国地方品种梅山猪和外国品种大白猪进行正反向杂交产生杂种梅大和大梅猪,用mRNA差异显示技术,分析了亲本和杂种猪背部皮下脂肪组织间基因差异表达.结果发现,在10条5'端随机引物和10条3'端锚定引物共100对引物组合的差异显示扩增下,共获得1500多条可重复的扩增条带,选取其中能够重复出现的40条差异表达带(在4组样本中不能同时出现的条带)进行重扩增、克隆并测序.通过GenBank/BLAST比对发现,其中有4条EST分别与GenBank序列同源性较高,其余36条属于新的EST,将这36条EST提交GenBank获得注册号,并选取其中的3条进行半定量RT-PCR验证并检测其相对表达,其中2条表现不同程度的差异,1条没有明显差异.为提高DDRT-PCR真阳性,实验中的4种组合各屠宰6头以建立RNA池,采取低高严谨结合的退火温度进行差异显示扩增以及只回收在2次PCR扩增均能重复出现的条带.结果表明,所获得的36条新的EST在亲子代之间的差异表达方式不尽相同,这些差异表达的基因可能与脂肪组织杂种优势的形成有关.