靶向性抗肿瘤融合蛋白EGF-E4orf4的表达及其细胞毒性的初步分析

• 作者: 卜鹏莉 王东梅 陈虹 黄秉仁
• 来源期刊: 癌症
• 学科: 生物学
• 关键词: EGF受体 腺病毒E4orf4蛋白 重组融合蛋白 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2005,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 33-39
• 页数: 7页
• 分类号: Q228
• 字数: 5798字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3321/j.issn:1000-467X.2005.01.007

摘要

背景与目的:人表皮生长因子(human epidermal growth factor,EGF)是一种通过受体起作用刺激细胞增殖和分化的重要生长因子.正常细胞的表面有EGF受体,但很多肿瘤尤其是实体瘤细胞表面则有异常高水平的EGF受体的表达.腺病毒早期区4第4编码蛋白,即腺病毒E4orf4蛋白(adenovims earlv region 4 open reading frame 4 protein)可以特异地诱导肿瘤细胞发生不依赖p53表达的凋亡,是一种新型的细胞毒因子.本研究旨在利用EGF的靶向性和E4orf4蛋白的细胞毒性,在分子水平设计合成一个融合蛋白,使其具有组成部分各自的生物学功能,即能够靶向性杀伤肿瘤细胞.方法:PCR和重叠PCR构建EGF-E4orf4融合基因,构建多拷贝酵母表达载体,转化毕赤酵母,筛选表达菌株,用阳离子交换层析纯化融合蛋白,用MTT比色法测定融合蛋白对BT325及MDA-MB-231细胞的毒性,流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:融合基因片段长度为805 bp,含有Kozak顺序、α-因子前导肽、EGF、连接区及E4orf4.获得了重组质粒pAO-EGF-E4orf4及含有3个表达单元的重组质粒pAO-3EGF-E4orf4.表达的融合蛋白分子量约为20 ku,与兔抗人EGF多克隆抗体进行免疫印迹反应结果呈阳性.融合蛋白EGF-E4orf4在高浓度(5μg/ml及0.5μg/m1)时,BT325及MDA-MB-231细胞生长受到抑制,其细胞活力低于对照细胞.融合蛋白EGF-E4orf4在每3×105个细胞10～25μg的浓度内,能够诱导15.4%～28.2%的MDA-MB-231细胞发生凋亡.结论:融合蛋白EGFE4orf4可以通过EGF介导进入细胞,发挥抑制肿瘤细胞生长的作用.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	黄秉仁		9	163	5.0	9.0
2	卜鹏莉		1	9	1.0	1.0
3	王东梅		1	9	1.0	1.0
4	陈虹		6	87	3.0	6.0